96 Испытание ЭЛИСА - наборы для анализа высокой воспроизводимости канамицина

Набор испытаний ELISA на канамицин

Описание продукта

РЕАГЕН^ТМKanamycin ELISA Test Kit представляет собой конкурентоспособный ферментный иммунотест для количественного анализа канамицина в мясе/печени/почки, клеточном лизате, моче, сыворотке и молоке.

Уникальные особенности комплекта:

• Высокая эффективность восстановления (> 80%), быстрые (10-40 минут) и экономичные методы извлечения.

• Предел обнаружения - 0,2 нг/г.

• Высокая воспроизводимость.

• Быстрый анализ ELISA (менее 1 часа независимо от количества образцов).

Обзор процедуры

Метод основан на конкурентном колориметрическом анализе ELISA. Канамицин-BSA был покрыт в колодцах пластин.Образец и антитело канамицина (антитело No 1) и HRP-конъюгат (антитело No 2) добавляются в колодцы для инкубации.Если остаток канамицина присутствует в образце, он будет конкурировать с канамицином на пластинках для антитела канамицина, вторичное антитело, помеченное ферментом пероксидазы,нацелен на первичное антитело, которое комплексируется с препаратом, покрытым на колодцах пластиныПолученная интенсивность цвета после добавления субстрата HRP (TMB) имеет обратную связь с концентрацией остатков канамицина в образце.

Содержание аппарата, срок хранения и срок годности

РЕАГЕН^ТМКомплект ELISA для анализа канамицина способен проводить 96 определений или испытания 42 образцов в двух экземплярах (при условии, что для стандартов используются 12 скважин).Возвратите неиспользованные микроворонки в мешок из фольги и запечатайте их с помощью осушителя, предоставленного в оригинальной упаковке.Храните комплект при температуре 2- 8°C.* Срок годности комплета составляет 12 месяцев при правильном хранении.

Если вы не планируете использовать комплект более 1 месяца, храните Канамицин стандартный запас, Канамицин антитела No 1 и HRP- конъюгированные антитела No 2 при температуре -20°C или в морозильнике.

Чувствительность (границы обнаружения)

Специфичность (крестовая реактивность)

Необходимые материалы не в комплекте

• Читатель микротитровых пластин (450 нм)

• Смеситель тканей (например, Omni Tissue Master Homogenizer)

• Миксер вихря (например, миксер Genie Vortex от VWR)

• 10, 20, 100 и 1000 л пипеты

• Многоканальная пипетка: 50-300 л (необязательно)

Предупреждения и меры предосторожности

• В стандарте содержится канамицин, обращайтесь с особой осторожностью.
• Не используйте комплект после истечения срока годности.
• Не смешивайте реагенты из разных наборов или партий, за исключением компонентов с одинаковыми номерами частей в пределах даты годности.
• Постарайтесь поддерживать лабораторную температуру 20°25°C (68°77°F). Избегайте выполнения анализов под или рядом с вентиляционными отверстиями, так как это может вызвать чрезмерное охлаждение, нагревание и/или испарение.не проводить анализы на прямом солнечном свете, так как это может вызвать чрезмерное нагревание и испарение.Во время инкубации следует избегать холодных стоек, поместив несколько слоев бумажного полотенца или другого изоляционного материала под пластинки для анализа..
• Убедитесь, что вы используете только дистиллированную или деионизированную воду, так как качество воды очень важно.
• При пипетировании проб или реагентов в пустую микротитровую пластину кончики пипеты помещают в нижний угол скважины, контактируя с пластмассой.
• Инкубации азема должны проводиться как можно точнее. Будьте последовательны при добавлении стандартов в азема. Добавьте сначала свои стандарты, а затем свои образцы.
• Добавьте стандарты к пластине только в порядке от низкой концентрации до высокой концентрации, так как это минимизирует риск компрометации стандартной кривой.
• Всегда храните блюда в запечатанных мешках в холодильнике, чтобы сохранить их стабильность.Предотвратить образование конденсации на тарелках, позволяя им выравниваться до комнатной температуры (20°C / 68°F)..

Убедитесь, что образцы хранятся должным образом. Как правило, образцы должны храниться в холодильнике при температуре 2-4°C не более 1-2 дней. Если их необходимо хранить дольше, образцы должны быть заморожены до минимума -20°C.Замороженные образцы можно размораживать при комнатной температуре (20°C / 68°F) или в холодильнике перед использованием..

• Приготовление 1×разбавляющего для пробы:Смешать 1 объем 10×разбавляющего для пробы с 9 объемами дистиллированной воды.
• Подготовка 1 ×Буфер экст. выборки:Смешать 1 объем 10 × Sample Ext. буфера с 9 объемами дистиллированной воды.

Лизат клеток

• Возьмите 100 л клеточного лизата, добавьте 900 л буфера разбавляющего 1×образец, хорошо перемешайте.

• Центрифугируйте в течение 5 минут при 4000 x g.

• Для анализа выписывайте 50 л сверхносителя на скважину.

Примечание: Коэффициент разведения: 10.

Креветки/рыба/мясо/печень/почки

• К 1,0 г гомогенизированного образца добавляют 4,0 мл буфера 1 × Sample Ext.

• Вортекс образец в течение 1 минуты с вихревым смесителем.

• Пробу центрифугируют в течение 5 минут при температуре 4000 x g.

• Осторожно переносите 200uL верхнего слоя в новую трубку,добавить 1.375 мл 1X разбавителя пробы и 25 uL буфера баланса пробы, вихрь в течение 30 секунд.

• Для анализа используется 50uL на скважину.

Примечание: Коэффициент разведения: 40.

Моча/ сыворотка

• Взять 50уЛ образца мочи или сыворотки, добавить 1,2 мл 1x растворителя образца, хорошо перемешать.

• Центрифугируйте в течение 5 минут при 4000 x g.

• Для анализа принимают 50 л наднаселяющего вещества на скважину.

Примечание: Коэффициент разведения: 25.

Молоко

• Добавить 100уЛ образца молока в центрифугу, добавить 900уЛ 1x разбавляющего образца.
• Вихрь энергично в течение 30 секунд.
• Центрифугируйте при 4000 х г в течение 10 минут.
• Для анализа используется 50 л образца сверхнаходящего вещества.

Примечание: Фактор разведения:10

Протокол тестирования на КАНАМИЦИН ЭЛИЗА

Приготовление реагента

Важно: все реагенты должны быть приведены до комнатной температуры перед использованием. (1 2 часа на20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°Обязательно прочтите раздел " Предупреждения и меры предосторожности " на страницеСтраница3.Растворы должны быть подготовлены незадолго до испытания ЭЛИСА. Все реагенты должны быть смешаны путем мягкого переворачивания или вращения перед использованием. Подготовить объемы, необходимые для количества скважин.Не возвращайте реагенты в оригинальные трубки/бутылкиИспользование одноразовых резервуаров при обращении с реагентами может минимизировать риск загрязнения и рекомендуется.

• Приготовление 1X раствора для промывки

Смешать 1 объем раствора 20X с 19 объемами дистиллированной воды.

Протокол испытаний ELISA

Ориентировочно на каждой полоске, которая будет использоваться, и на аликвоте реагентов следует следующий пример:

• Добавьте по 50 л каждая канамициновая стандартка в двух экземплярах в разные колодцы (добавьте стандарты в тарелку только в порядке от низкой концентрации до высокой концентрации).

• Добавьте по 50 л каждого образца в двух экземплярах в разные пробирки.

• Добавьте 50 л HRP-конъюгированного Ab # 2 в каждую скважину и 50 л канамицин антитела # 1 в каждую скважину.

• Инкубируйте тарелку в течение 30 минут при комнатной температуре (20 25°C / 68 77°F).Во время инкубации избегайте прямых солнечных лучей и холодных стоек.

• После последней стирки переверните тарелку и нежно нажмите на бумажные полотенца, чтобы высушить тарелку (Проведите следующий шаг сразу после мытья тарелок.Не допускайте сушки пластины между рабочими этапами).

• Добавьте 100 мл субстрата ТМБ. Время реакции сразу после добавления субстрата. Смешайте раствор, мягко качая пластину вручную в течение 30 секунд во время инкубации.Не помещайте субстрат обратно в исходный контейнер, чтобы избежать возможного загрязнения.Рекомендуется закрывать микротитерную пластину во время инкубации).

• После 15 минут инкубации при комнатной температуре (20 ¢ 25°C / 68 ¢ 77°F), добавить 100 л Stop Buffer, чтобы остановить реакцию фермента.

• Читайте табличку как можно скорее после добавления "Стоп-буфера" на читателе табличек с длиной волны 450 нм (Прежде чем читать,Используйте на нижней части пластинки безнадёжный салфетку, чтобы не допустить помех влаги или отпечатков пальцев).

Расчеты концентрации канамицина

Стандартная кривая может быть построена путем графика средней относительной абсорбанции (%) полученной от каждого эталонного стандарта против его концентрации в нг/мл на логарифмической кривой.

Относительное поглощение (%) =стандарт нулевого поглощенияили пробы x 100

Для определения соответствующей концентрации исследуемого препарата в нг/мл из стандартной кривой используются средние значения относительного поглощения для каждого образца.

Следующий рисунок представляет собой типичную стандартную кривую хлорамфеникола.