96 наборов теста теста ЭЛИСА для воспроизводимости обнаружения Канамысин высокой

Набор теста Kanamycin ELISA

Характер продукции

Набор теста Kanamycin ELISA ^™ REAGEN конкурсный immunoassay энзима для количественного анализа Kanamycin в мясе/печени/почке, lysate клетки, моче, сыворотке и молоке.

Уникальные особенности набора являются следующими:

• Высокие спасение (>80%), быстрое (10-40 минут), и рентабельные методы извлечения.

• Предел обнаружения 0,2 ng/g.

• Высокая воспроизводимость.

• Быстрый assay ELISA (более менее чем 1 час независимо от количества образцов).

Обзор процедуры

Метод основан на конкурсном колориметрическом assay ELISA. Kanamycin-BSA был покрыт в колодцах плиты. В процессе анализа, образец и антитело Kanamycin (антитело #1) и HRP-конъюгат (HRP-проспряганное антитело #2) добавлено к колодцам для инкубации. Если выпарка Kanamycin присутствует в образце, то она состязается с Kanamycin на колодцах плиты для антитела Kanamycin, вторичного антитела, маркированного с энзимом пероксидазы, цели основное антитело которое complexed к лекарству покрытому на колодцах плиты. Приводя интенсивность цвета, после добавления субстрата HRP (TMB), имеет обратное отношение с концентрацией выпарки Kanamycin в образце.

Содержание, хранение и срок годности при хранении набора

Набор теста Kanamycin ELISA ^™ REAGEN имеет емкость для 96 определений или испытывать 42 образцов в дубликате (принимая 12 колодца для стандартов). Возвратите все неиспользованные microwells в сумку фольги и заново герметизируйте их с осушителем обеспеченным в первоначальном пакете. Храните набор на 2-8°C *. Срок годности при хранении 12 месяца когда набор как следует хранится.

Если вы не планируете использовать набор на сверх 1 месяц, то запас Kanamycin магазина стандартный, антитело #1and Kanamycin HRP-проспрягал антитело #2 на -20°C или в замораживателе.

Чувствительность (предел обнаружения)

Характерность (перекрестная реактивность)

Требуемые материалы не обеспеченные с набором

• Читатель плиты Microtiter (450 nm)

• Смеситель ткани (например гомогенизатор мастера ткани Omni)

• Смеситель вортекса (например смеситель вортекса джинов от VWR)

• пипетки 10, 20, 100 и 1000 uL

• пипетка Мульти-канала: 50-300 uL (опционный)

Предупреждения и меры предосторожности

• Стандарты содержат Kanamycin. Ручка с определенной заботой.
• Не используйте набор за сроком годности.
• Не перемешайте реагенты от различных наборов или серии за исключением компонентов с таким же номером детали внутри их сроки годности. АНТИТЕЛА И ПЛИТЫ KIT-AND LOT-SPECIFIC.
• Попробуйте поддерживать температуру лаборатории 20°-25°C (68°-77°F). Ход Avoid assays под или около вентиляционными отверстиями, по мере того как это может причинить чрезмерные охлаждать, топление и/или испарение. Также, не побегите assays в сразу солнечном свете, по мере того как это может причинить избыточное тепло и испарение. Холодные верхние части стенда следует избежать путем устанавливать несколько слоев полотенца бумаги или некоторого другого материала изоляции под плитами assay во время инкубации.
• Убеждайтесь что вы использующ только дистиллирует или деионизированная вода в виду того что качество воды очень важно.
• Капая образцы или реагенты из пипетки в пустую плиту microtiter, установите подсказки пипетки в более низком угле колодца, кашась с пластмассой.
• Инкубации плит assay должны быть приурочены как можно точнее. Последователен при добавлении стандартов к плите assay. Добавьте ваши стандарты сперва и после этого ваши образцы.
• Добавьте стандарты для того чтобы покрыть только в заказе от низкой концентрации к высокой концентрации по мере того как это уменьшит риск компрометировать стандартную кривую.
• Всегда refrigerate плиты в загерметизированных сумках с осушителем для поддержания стабильности. Предотвратите конденсацию от формировать на плитах путем позволять им эквилибрировать к комнатной температуре (20 – 25°C/68 – 77°F) пока в упаковке.

Уверенный что образцы как следует хранится. Вообще, образцы должны быть refrigerated на 2-4°C на не больше чем 1-2 дней. Образцы замораживания к минимум -20°C если им нужно храниться на более длинный период. Замерли образцы можно растаять на temps комнаты (20 – 25°C/68 – 77°F) или в холодильнике перед использованием.

• Подготовка разжижителя 1×Sample: Смешивание 1 том разжижителя 10×Sample с 9 томами дистиллированной воды.
• Подготовка 1×Sample Ext. буфер: Смешивание 1 том 10×Sample Ext. буфер с 9 томами дистиллированной воды.

Клетка Lysate

• Примите uL 100 lysate клетки, добавьте uL 900 буфера разжижителя 1×Sample, смешайте хорошо.

• Центрифуга на 5 минут на G. 4000 x.

• Примите uL 50 супернатанта в колодец для assay.

Примечание: Множитель дилюции: 10.

Мясо креветки/рыб/печень/почка

• До 1,0 g из гомогенизированного образца, добавьте 4.0mL 1×Sample Ext. буфер,

• Вортекс образец на минуты 1 со смесителем вортекса.

• Центрифугуйте образец на 5 минут на G. 4 000 x.

• Осторожно передача 200uL верхнего слоя к новой трубке, добавляет 1.375mLразжижителяобразца1Xи25uLбуферабалансаобразца, вортексана30секунд.

• Используйте 50uL в колодец для assay.

Примечание: Множитель дилюции: 40.

Моча/сыворотка

• Примите 50uL мочи или образец сыворотки, добавляет 1,2 mL разжижителя образца 1X, смешивает хорошо.

• Центрифуга на 5 минут на G. 4 000 x.

• Примите 50uL супернатанта в колодец для assay.

Примечание: Множитель дилюции: 25.

Молоко

• Добавьте 100uL образца молока в трубку центрифуги, добавьте 900uL разжижителя образца 1X.
• Вортекс энергично на 30 секунд.
• Центрифуга на 4 000 x g на 10 минут.
• Используйте 50uL образца супернатанта для assay.

Примечание: Множитель дилюции: 10

ПРОТОКОЛ НАБОРА ТЕСТА KANAMYCIN ELISA

Подготовка реагента

ВАЖНЫЙ: Все реагенты должны быть принесены до комнатной температуры перед использованием (1 до 2 часа на 20 до 25°C/68 до°F 77); Убеждайтесь что вы прочитанный «раздел предупреждений и мер предосторожности» на решения страницы 3. должно быть подготовлено как раз до теста ELISA. Все реагенты должны быть смешаны нежно переворачивать или завихряться до пользы. Подготовьте тома которые необходимы для числа будучи бежать колодцев. Не возвратите реагенты в первоначальные трубки/бутылки запаса. Используя устранимые резервуары когда регуляция реагентов может уменьшить риск загрязнения и порекомендована.

• Подготовка моющего раствора 1X

Смешивание 1 том моющего раствора 20X с 19 томами дистиллированной воды.

Протокол испытания ELISA

Обозначьте индивидуальные прокладки которые будут использованы и реагенты аликвота как следующий пример:

• Добавьте uL 50 стандартов каждого Kanamycin в дубликате в различные колодцы (добавьте стандарты для того чтобы покрыть только в заказе от низкой концентрации к высокой концентрации).

• Добавьте uL 50 каждого образца в дубликате в различные колодцы образца.

• Добавьте uL 50 uL HRP-Спрягать Ab#2 к каждому колодцу и 50 антитела #1 Kanamycin к каждому колодцу. Смешайте хорошо нежно трясти плиту вручную для 30s.

• Инкубируйте плиту на 30 минут на комнатной температуре (20 – 25°C/68 – 77°F). (Избегите сразу солнечного света и холодных верхних частей стенда во время инкубации. Покрывать плиту microtiter пока порекомендован инкубировать).

• Помойте плиту 4 раза с uL 250 моющего раствора 1X. После последнего мытья, переверните плиту и нежно выстучайте сухой плиты на бумажных полотенцах (выполните следующий шаг немедленно после стирок плиты. Не позвольте плите проветрить сухой между шагами деятельности).

• Добавьте uL 100 субстрата TMB. Приурочьте реакцию немедленно после добавления субстрата. Смешайте решение нежно трясти плиту вручную для 30s пока инкубирующ (не положите никакую заднюю часть субстрата к первоначальному контейнеру для избежания любого потенциального загрязнения. Любое решение субстрата показывая колорит признаковое ухудшения качества и должно быть сброшено. Покрывать плиту microtiter пока порекомендован инкубировать).

• После инкубировать на 15 минут на комнатной температуре (°F 20 до 25°C/68 до 77), добавьте uL 100 буфера стопа для того чтобы остановить реакцию энзима.

• Прочитайте плиту как можно скорее следовать добавлением буфера стопа на читателе плиты с длиной волны 450 nm (перед чтением, используйте свободное от корпи оботрите на дне плиты для обеспечения что никакие влага или отпечатки пальцев не мешают с чтениями).

Вычисления концентрации Kanamycin

Стандартная кривая может быть построена путем прокладка курса среднего относительного absorbance (%) получила от каждого стандарта ссылки против своей концентрации в ng/mL на логарифмической кривой.

Относительный absorbance (%) = absorbance нул стандарт или образцов x 100

Используйте средние относительные значения absorbance для каждого образца для того чтобы определить соответствуя концентрацию испытанного лекарства в ng/mL от стандартной кривой.

Следующая диаграмма кривая типичного хлорамфеникола стандартная.